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PCR新手指南：复性温度的选择标准
日期：2025-04-29 15:19
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摘要：PCR新手指南：复性温度的选择标准
复性温度的选择标准应该是可扩增范围的中间温度。
在使用温度梯度的方法寻找复性温度时，新手往往会选择扩增产物多的温度条件，然而在此后的非梯度扩增时扩增效果又不太理想。出现这种现象的主要原因是复性温度的选择标准不对。本人10多年前做过数千个基因的扩增，通过温度梯度实验发现，能扩增出来的温度范围般在3-30度。选择的标准应该是可扩增范围的中间温度。
因为：
1、扩增产物量的影响因素很多，有些是随机的。从定量PCR的平台期低的不规律可以看出来。
2、不同仪...
PCR新手指南：复性温度的选择标准
复性温度的选择标准应该是可扩增范围的中间温度。
在使用温度梯度的方法寻找复性温度时，新手往往会选择扩增产物多的温度条件，然而在此后的非梯度扩增时扩增效果又不太理想。出现这种现象的主要原因是复性温度的选择标准不对。本人10多年前做过数千个基因的扩增，通过温度梯度实验发现，能扩增出来的温度范围般在3-30度。选择的标准应该是可扩增范围的中间温度。
因为：
1、扩增产物量的影响因素很多，有些是随机的。从定量PCR的平台期低的不规律可以看出来。
2、不同仪器、不同位置的温度及温度变化曲线是有差异的。按照仪器厂的出厂标准也准确性+-0.3度及均匀性+-0.3度
3、PCR仪进行梯度扩增时的温度准确性会更差
选择中间温度可以消除仪器温度差的影响。
复性温度的选择标准应该是可扩增范围的中间温度。
在使用温度梯度的方法寻找复性温度时，新手往往会选择扩增产物多的温度条件，然而在此后的非梯度扩增时扩增效果又不太理想。出现这种现象的主要原因是复性温度的选择标准不对。本人10多年前做过数千个基因的扩增，通过温度梯度实验发现，能扩增出来的温度范围般在3-30度。选择的标准应该是可扩增范围的中间温度。
因为：
1、扩增产物量的影响因素很多，有些是随机的。从定量PCR的平台期低的不规律可以看出来。
2、不同仪器、不同位置的温度及温度变化曲线是有差异的。按照仪器厂的出厂标准也准确性+-0.3度及均匀性+-0.3度
3、PCR仪进行梯度扩增时的温度准确性会更差
选择中间温度可以消除仪器温度差的影响。
另外，进行温度梯度时模板量的选择也是非常重要的。
上海嘉鹏科技有限公司专业生产：紫外分析仪、三用紫外分析仪、暗箱式紫外分析仪、暗箱三用紫外分析仪、暗箱紫外分析仪、手提式紫外分析仪、三用紫外分析仪暗箱式、紫外检测仪、部分收集器、恒流泵、蠕动泵、凝胶成像系统、凝胶成像分析系统、化学发光成像分析系统、光化学反应仪、旋涡混合器、漩涡混合器、玻璃层析柱、梯度混合器、梯度混合仪、核酸蛋白检测仪、玻璃层析柱、荧光增白剂测定仪、馏分收集器、切胶仪、蓝光切胶仪、层析系统等产品。欢迎来电咨询。
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