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植物染色体DNA的抽取及浓度测定说明

日期:2020-09-21 00:53
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摘要:

 
、原理
植物组织中大部分是核DNA,它和组蛋白、非组蛋白结合在起,以核蛋白的形式存在于细胞核内。CTAB:是种阳离子去污剂,
可溶解细胞膜,它能与核酸形成复合物,在盐溶剂中(0.7mol/L NaCl)是可溶的,当降低溶剂盐的浓度到定程度(0.3mol/L NaCl)
时从溶剂中沉淀,通过离心就可将CTAB与核酸的复合物同蛋白、多糖类物质分开,然后将CTAB与核酸的复合物沉淀溶解于盐溶剂中,
再加入乙醇使核酸沉淀,CTAB能溶解于乙醇中。
在DNA提取过程中必须始终注意以下几个关键问题:
(1)DNA的结构和双链易受多种因素的影响引起双链解开,即“变性”,因此抽提时避免使用变性的条件。
(2)抑制内外源DNase的活力。DNase就象把刀,它能把大分子的DNA切成碎片,所以要加以杜,现可以通过多种途径来做到这点:a、
低温操作;b、调节pH,使偏碱(pH8.0);c、抽提液中加表面活性剂;d、加螯合剂(EDTA)除去酶的铺助因子(Mg2+),使酶活性丧失。
(3)防止化学降解。如过酸或过碱以及其它化学因素,会使DNA降解,般综合考虑,取pH8.0左右为宜。
(4)防止物理因素降解。如温度太或机械张力剪切等,DNA分子特别大,其分子量可达1012道尔顿,易被机械张力拉断,甚至在细管中稍急
些的流动也会使DNA断裂,所以在抽提过程中要特别注意这点,操作过程要尽量简便、温和、减少搅拌次数,也不要剧烈摇动。
(5)植物的次生代谢物对核酸提取有干扰作用。因此,般尽可能选幼嫩的、代谢旺盛的新生组织作为提取DNA的材料,这是因幼嫩的新生组织
次生代谢物较少,DNA含量,且易于破碎,植物材料好是新鲜的。
分离提取植物DNA的方法很多,本实验采用CTAB法提取DNA并通过紫外吸收法和电泳鉴定。